Bibliographic Metadata

Title
Charakterisierung von Natrialba magadii L13 Mutanten
Additional Titles
Characterisation of Natrialba magadii L13 Mutants
AuthorSchafellner, Stanislaus
Published2012
Date of SubmissionJuly 2012
LanguageGerman
Document typeBachelor Thesis
Keywords (DE)haloalkaliphiles Archaeon / Natrialba magadii / Halophage Phi-Ch1 / Tryptophanase Klonierung / open reading frame (ORF) 79
Keywords (EN)haloalkaliphil archaeon / Natrialba magadii / halophage Phi-Ch1 / tryptophanase cloning / open reading frame (ORF) 79
Restriction-Information
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Classification
Abstract (German)

Charakterisierung von Natrialba magadii L13 Mutanten

In dieser Arbeit werden mehrere Versuche mit dem haloalkaliphilen Archaeon Natrialba magadii

und dem Phagen Phi-Ch1 beschrieben.

Eine der Aufgaben war es, das Protein ORF 79 in N. magadii überexprimieren zu lassen.

Hierfür wurde ein mittels Tryptophanase induzierbarer Promotor (ptnaN) vor den open reading frame 79 kloniert.

Eine weitere Aufgabe war es die Tryptophanase, ein Enzym welches die Aminosäure Tryptophan spaltet, gezielt

durch eine Deletionsmutante auszuschalten.

Um dies erreichen zu können wurde ein Plasmids konstruiert, in welchem sich die, durch eine

Novobiocin-Resistenzkassette unterbrochene Version des Tryptophanase Operons befand.

Bei einem anderen Versuch wurde die Überexpression des Proteins ORF 79 in E. coli Kulturen nachgewiesen.

Hierfür wurde der ORF 79 hinter einen, mit IPTG induzierbaren Promotor kloniert.

Außerdem wurde der Wildtyp Phage Phi-Ch1 aus N. magadii L11 mit Hilfe eines CsCl Stufengradienten isoliert.

All diese Versuche dienten der genaueren Untersuchung des ORF 79 des Phagen Phi-Ch1 und dem Erkenntnisgewinn über

dessen Exprimierung im Archaeon N. magadii.

Abstract (English)

Charakterisierung von Natrialba magadii L13 Mutanten

In this work several experiments with the haloalkaliphil archaeon Natrialba magadii

and the phage Phi-Ch1 have been done.

One task was to investigate the protein overexpression from ORF 79 in N. magadii. Therefore

ORF 79 was cloned behind a tryptophan inducible promoter.

Another task was to delete the tryptophanase, an enzyme that cleaves the amino acid

tryptophan, with a deletion mutant. This was done by using a constructed plasmid, in which

the tryptophanase operon was interrupted by a novobiocin resistance cassette.

In another experiment the aim was to perform an overexpression of the protein encoded by

ORF 79 in E. coli cultures. Therefore ORF 79 was cloned under the control of an IPTG

inducible promoter.

In addition, the wild-type phage Phi-Ch1 was isolated from N. magadii L11 by using a CsCl

gradient.

All these tests were done to get more information about the ORF 79 of phage Phi-Ch1 and to

gain knowledge about its expression in the archaeon N. magadii.