Titelaufnahme

Titel
Methodenvergleich der Analyse des Eml4-ALK Rearrangement bei NSCLC PatientInnen
Weitere Titel
Comparison of methods of analysis of the EML4-ALK rearrangement in NSCLC patients
VerfasserRainbacher, Anna Katharina
GutachterStefanik, Veronika
Erschienen2013
Datum der AbgabeJuni 2013
SpracheDeutsch
DokumenttypBachelorarbeit
Schlagwörter (DE)Testauswertung / Crizotinib / Detektionsmethoden / Eml4-ALK / FISH / Fluoreszenzmikroskop / Klassische Therapiemöglichkeiten / Lungenkarzinom / Methodenvergleich / NSCLC / Resistenzmechanismen / Signalweg / Stadieneinteilung / Zielgerichtete Therapie (Targeted Therapy)
Schlagwörter (EN)crizotinib / detection methods / Eml4-ALK / FISH / feluorescenc microscope / classical treatmant options / lung cancer / comparison of methods / non small cell lung cancer / mechanism of resistance / signalling pathway / staging / analysis of test results / targeted therapy
Zugriffsbeschränkung
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Klassifikation
Zusammenfassung (Deutsch)

Das Lungenkarzinom stellt weltweit die häufigste tumorbedingte Todesursache dar. Aufgrund mangelnder Prädiagnostik und klinischer Symptomatik wird es meist erst im fortgeschrittenen Stadium diagnostiziert, wenn Metastasen vorliegen und eine Aussicht auf Heilung gering ist. In etwa 4-7% aller NSCLC Fälle kommt das Eml4-ALK Rearrangement vor, wobei es durch Fusion des N-terminalen Endes des Echinoderm-microtubule-associated-protein-like 4 (Eml4) Gens mit der intrazellulären Kinasedomäne des Anaplastic-Lyphoma-Kinase (ALK) Gens zur konstitutiven Expression einer aktiven Tyrosinkinase kommt, die ständig die nachgeschaltenen Signalwege anschaltet, welche Hemmung der Apoptose und Zellproliferation regulieren. PatientInnen mit einem Eml4-ALK Rearrangement profitieren von einer zielgerichteten Therapieform mit speziellen Tyrosinkinaseinhibitoren wie Crizotinib, die direkt in den Signalweg der mutierten Zelle durch Hemmung des Eml4-ALK Fusionsonkogens eingreifen und so das Tumorwachstum stoppen können. Die Goldstandardmethode zur Detektion dieses Rearrangements ist die Fluoreszenz in-situ Hybridisierung (FISH).

Ziel dieser Arbeit ist es, durch den Vergleich drei verschiedener FISH Kits (ZytoLight® SPEC ALK/EML4 TriCheck™ Probe Kit, Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit und ZytoLight® SPEC ALK Dual Color Break Apart Probe Kit) die optimale Analysemethode für das Labor zu etablieren. Insgesamt wurden 20 Routinebiopsieproben von NSCLC PatientInnen aus dem Jahr 2012, die bereits mit dem derzeit im Molekularpathologischen Labor des Kaiser Franz Josef Spitals routinemäßig eingesetzten ZytoLight® SPEC ALK/EML4 TriCheck™ Probe Kit getestet wurden, mit dem Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit und dem ZytoLight® SPEC ALK Dual Color Break Apart Probe Kit analysiert und die Ergebnisse verglichen. Für die statistische Auswertung wurde der McNemar Test herangezogen. Es zeigte sich, dass sich die Ergebnisse der drei Kits bezüglich Test positiv bzw. Test negativ nicht signifikant unterscheiden. Doch anhand der Häufigkeitsverteilung der zusätzlich analysierten Merkmale Signalstärke und Vorhandensein von Artefakten eine Entscheidung zu Gunsten des ZytoLight® SPEC ALK Dual Color Break Apart Probe Kit getroffen werden kann.

Zusammenfassung (Englisch)

Lung cancer is the leading cancer-related cause of death in men and women worldwide. Due to lack of screening methods and clinical symptoms, it is usually diagnosed at an advanced stage, when metastases are present and a cure is almost hopeless. In approximately 4-7% of NSCLC cases the Eml4-ALK rearrangement occurs. Due to the fusion of the N-terminal end of the EML4 gen with the intracellular kinase domain of the ALK gen a constitutive active tyrosine kinase which permanently activates downstream signaling pathways inhibiting apoptosis and stimulating proliferation, is expressed. Patients harbouring an EML4-ALK rearrangement benefit from a targeted therapy with special tyrosine kinase inhibitors such as crizotinib. These inhibitors directly intervene in the signaling pathway of the mutated cell through inhibition of the EML4-ALK fusion protein. The gold standard method for detecting this rearrangement is the fluorescence-in –situ-hybridization(FISH).

The aim of this study is to establish the best detection method for the laboratory through comparing three different FISH kits (ZytoLight ® SPEC ALK/EML4 TriCheck ™ probe kit, Vysis ALK Break Apart FISH probe kit and ZytoLight ® SPEC ALK Dual Color Break Apart probe kit). A total of 20 routine biopsy specimens of NSCLC patients from the year 2012 that have already been tested with the ZytoLight ® SPEC ALK/EML4 TriCheck ™ probe kit which is currently used in molecular pathology laboratory of the Kaiser Franz Josef Hospital, are also analyzed with the Vysis ALK Break Apart FISH probe kit and the ZytoLight ® SPEC ALK Dual Color Break Apart probe kit. Finally the results are compared. For the statistical evaluation the McNemar test was used. It turned out that the results of the three test kits regarding positive or negative test did not differ significantly. However, based on the frequency distribution of the additional analyzed features signal strength and presence of artifacts, a decision in favor of ZytoLight ® SPEC ALK Dual Color Break Apart Probe Kit can be made.