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Title
Evaluierung molekulardiagnostischer Methoden für das Management der CML
Additional Titles
Evaluation of molecular diagnostic methods for the management of CML
AuthorAlt, Isabella
Thesis advisorZahradnik, Michaela
Published2014
Date of SubmissionJune 2014
LanguageGerman
Document typeBachelor Thesis
Keywords (DE)Chronisch myeloische Leukämie / Internationale Skala / Referenzgen / bcr-abl / Rotor-Gene Q 5plex HRM Thermocycler / BCR-ABL1 Mbcr IS-MMR DX / LightMix Kit bcr-abl t(9 / 22) / LightCycler 2.0 / GeneXpert / Xpert®BCR-ABL Monitor
Keywords (EN)chronic myeloid leukemia / International Scale / reference-gene / bcr-abl / Rotor-Gene Q 5plex HRM Thermocycler / BCR-ABL1 Mbcr IS-MMR DX / LightMix Kit bcr-abl t(9 / 22) / LightCycler 2.0 / GeneXpert / Xpert®BCR-ABL Monitor
Restriction-Information
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Classification
Abstract (German)

Seit der Einführung der Tyrosinkinaseinhibitoren zur Behandlung von chronisch myeloischer Leukämie, werden große Therapieerfolge erzielt. Immer mehr Patienten/Patientinnen erreichen ein bedeutendes molekulares Ansprechen und einige sogar eine therapiefreie Remission. Der Fortschritt in der Therapie bedeutet ebenso neue Anforderungen an das CML-Monitoring. Einheitliche Definitionen des Therapieansprechens, standardisierte und sensitive Nachweismethoden sind die Hauptkriterien für ein optimales CML-Management. Die Etablierung der Internationale Scale (IS) ermöglicht eine standardisierte Quantifizierung der bcr-abl Fusionstranskripte. Durch die Herstellung kommerzieller standardisierter Kits wurde der Zugang zur IS für Routinelabors wesentlich erleichtert.

Im Rahmen dieser Arbeit wurden zwei standardisierte Systeme (GeneXpert, Xpert®BCR-ABL Monitor von Cepheid und Rotor-Gene Q 5plex HRM Thermocycler, BCR-ABL1 Mbcr IS-MMR DX von Quiagen) mit dem derzeitigen Goldstandard (LightMix Kit bcr-abl t(9;22), LightCycler 2.0 von Roche) zur Detektion von bcr-abl im molekularpathologischen Labor des Pathologisch-Bakteriologischen Instituts, im Kaiser-Franz-Josef-Spital verglichen. Dafür wurden archivierte Proben mit der RotorGene Plattform nachgemessen und mit den vorliegenden Daten des LightCyclers verglichen. Eingehende Routineproben wurden mit dem GeneXpert System analysiert und nach RNA-Isolation mit der manuellen LightCycler Methode getestet. Ziel dieser Arbeit war, die Sensitivitäten der Methoden zu evaluieren und ihre Vor- und Nachteile für den Routinebetrieb hervorzuheben. Die statistische Datenauswertung ergab keinen signifikanten Unterschied in der Sensitivität der Methoden. Auf Grund der geringen Stichprobenanzahl ist dieses Ergebnis jedoch kritisch zu betrachten. Die Etablierung einer standardisierten Methode würde dennoch einen großen Beitrag zu einem qualitativen CML-Management leisten.

Abstract (English)

The introduction of TKI for treatment has facilitated great success in the therapy of chronic myeloid leukemia. More and more patients can achieve a major molecular response and some even therapyfree remission. The progress in therapy implies new requirements for the CML-monitoring. Consistent definitions of therapy response, standardized and sensitive detectionmethods are main criteria for an optimal CML-management. The establishment of the International Scale (IS) enabled a standardized quantification of the bcr-abl fusion-transcripts. With the availability of commercial standardized kits, access to the IS for routine laboratories was considerably eased.

In the framework of this thesis two standardized systems (GeneXpert, Xpert®BCR-ABL Monitor from Cepheid and Rotor-Gene Q 5plex HRM Thermocycler, BCR-ABL1 Mbcr IS-MMR DX from Quiagen) were compared with the current goldstandard (LightMix Kit bcr-abl t(9;22), LightCycler 2.0,Roche) for detection of bcr-abl in the molecular-pathology laboratory of the Pathology-Bacteriology Institute of the Kaiser-Franz-Josef-Spital. Therefore archived samples were re-analyzed with the RotorGene platform and compared with the data obtained from the LightCycler system. Incoming routine samples were analyzed with the GeneXpert system and after RNA-isolation tested with the manual method. Aim of this thesis was to evaluate the sensitivities of the methods and bring out their benefits and disadvantages in routine operation. The statistical data analysis shows no significant difference between the sensitivities of the methods. Due to the small sample size, this result needs to be considered critically. The establishment of a standardized method would provide an important contribution for the quality of CML-management.