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Title
Etablierung von Thermolysinvorbehandlung für den IHC-Nachweis von pathologischem Protein bei Creutzfeldt-Jakob und M. Parkinson an autopsiertem Gehirn
Additional Titles
Establishment of thermolysin-pretreatment for IHC-evidence of pathologic protein in Creutzfeldt-Jakob and Parkinson's disease on brain tissue
AuthorHaidvogl, Anja
Thesis advisorGstinig, Karin
Published2016
Date of SubmissionSeptember 2016
LanguageGerman
Document typeBachelor Thesis
Keywords (DE)Neurodegenerative Erkrankungen / Prionprotein / Creutzfeldt-Jakob-Erkrankung / α-Synuclein / Morbus Parkinson / Diagnostik / Immunhistochemie / Thermolysin
Keywords (EN)neurodegenerative disease / prion protein / Creutzfeldt-Jakob disease / α-synuclein / Parkinson's disease / diagnostics / immunohistochemistry / thermolysin
Restriction-Information
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Classification
Abstract (German)

Diese Arbeit beschäftigt sich mit der Darstellung von Protease-resistenten und Proteasesensitiven Proteinen, welche bei Creutzfeld-Jakob-Erkrankung und Morbus Parkinson auftreten und schwierig diagnostizierbar sind. Diese Pilotstudie beschäftigt sich mit der Frage, ob und mit welcher Enzymkonzentration diese Proteine mittels Immunhistochemie (IHC) und Verwendung von Thermolysin detektiertbar sind. Das Protease K-resistente, sowie das Protease K-sensitive Prionprotein sind gegenüber dem Verdau mit Thermolysin resistent, während das zelluläre Prionprotein durch dieses Enzym verdaut wird. Eine Thermolysinkonzentration von 5µg/ml für 10 Minuten bei 37°C erwies sich mit voreingehender Autoklavierung und Ameisensäurebehandlung als gleichwertige immunhistochemische Behandlung für Prionen zur IHC mit Proteinase K. Der Vorteil zur Proteinase K ist, dass durch das Thermolysin auch das Proteinase-sensitive Protein erhalten bleibt. Es sind weitere Forschungsarbeiten mit verschiedenen Vorbehandlungen nötig, sowie die Austestung der geeignetsten Thermolysinkonzentration passend zu den α-SynucleinAntikörpern. Außerdem sind die Analysen mit Westernblot und PET-Blot mit Thermolysin zur Differenzierung der Proteine der α-Synucleinopathien wichtig.

Abstract (English)

This thesis deals with the representation of protease-resistant and protease-sensitive proteins. These proteins appear in Creutzfeldt-Jakob and Parkinson's disease, which are both difficult to diagnose. The main question of this pilot study is, whether thermolysin can be used to detect those proteins immunohistochemically and what concentration is needed for it. Protease K-sensitive and protease K-resistant isoforms of the disease-related prionprotein resists degradation with thermolysin while cellular prionprotein is digested. Equivalent results were shown by using themolysin with 5µg/ml (10 minutes at 37°C) and pretreatement with autoclaving and formic acid as by applying Protease K. The advantage of thermolysin is that it conserves the protease-sensitive proteins, while Protease K doesn't. Further research studies with different pretreatements are needed and also further analysis concerning the concentration of thermolysin for variant a-synuclein-antibodies (in Parkinson's disease) are necessary. Furthermore analysis using western blot and paraffin-embedded tissue blot with thermolysin to differentiate the proteins of α-synucleinopathies are recommended.